东当归乙醇提取物对小鼠学习记忆的影响

东当归乙醇提取物对小鼠学习记忆的影响

老年痴呆是一种异质性疾病，具有特征性神经病理和神经化学改变，发病多为老年前期，但老年期的发病率更高［1］。65岁以上老人中明显痴呆者约占2%～5%，而85岁以上的老人中几乎一半患有不同程度的老年痴呆。当归芍药散是由当归、芍药、川芎、茯苓、白术、泽泻组成的传统中药处方，国内外文献报道其对老年痴呆症具有一定的治疗效果［2，3］。但是当归单味药材对老年性痴呆疗效研究报道不多。因此，本实验主要研究东当归乙醇提取物对小鼠学习记忆的改善作用。
　　1  材料与仪器
　　1.1  动物实验用小鼠，购于延边大学药学院动物科，体质量（20±2）g。
　　1.2  试药与仪器东当归，氢溴酸东莨菪碱注射液（SCOP）（上海禾丰制药有限公司），石杉碱甲（河南竹林众生制药股份有限公司），无水乙醇为分析纯，蒸馏水。YLS-3T型跳台记录仪（山东省医学科学院设备站），RE-52C旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司），方型水迷宫仪（中国医学科学院药物研究所），Y型电迷宫仪（中国医学科学院药物研究所）。
　　2  方法
　　2.1  东当归乙醇提取物的制备东当归粉碎过20目筛，准确称取，加入8倍量80%乙醇加热回流提取2 h，共3次，合并滤液，减压抽滤，将滤液于水浴上减压蒸馏至无醇味，得到当归的乙醇提取物 。
　　2.2  实验药物剂量设置东当归高剂量为500 mg/kg，中剂量为250 mg/kg，低剂量为125 mg/kg，氢溴酸东莨菪注射液2 mg/kg，石杉碱甲85 μg/kg。
　　2.3  实验设计对小鼠学习记忆改善作用的研究实验分别采用避暗实验、跳台实验、水迷宫实验、Y型迷宫穿梭实验。实验小鼠随机分为6个组，每组含8～10只动物。实验给药剂量组分为石杉碱甲组（阳性组）、SCOP组、空白组、东当归乙醇提取物高剂量组（东当归A组）、东当归乙醇提取物中剂量组（东当归B组）、东当归乙醇提取物低剂量组（当归C组），连续灌胃30 d，期间所有动物自由进食饮水，小鼠末次给药后除空白组外，其余各组均注射SCOP，10 min后进行各组实验。
　　2.3.1  避暗实验采用被动回避性条件反射仪进行避暗实验，将小鼠面部背向洞口放入明室，同时启动记录装置，记录小鼠第1次进入暗室的时间，此为触电潜伏期，并记录5 min内小鼠进入暗室的错误次数作为记忆指标，24 h后重复测试。
　　2.3.2  跳台实验将小鼠放入跳台反射箱内适应3 min，然后通以38 V交流电，小鼠受到电击后多数跳上跳台逃避电击。记录小鼠第1次跳下时间，此为触电潜伏期，并记录5 min内小鼠跳下次数，24 h后重复测试。
　　2.3.3  水迷宫实验造模后10 min进行水迷宫训练。第1次训练将小鼠放在安全台附近G4处，让其自行游上终点两次，第2次训练将小鼠放在中部G2、G3处，然后第3次训练时让小鼠游全程。设定时间为2 min，超过2 min不能游出者按2 min计。记录小鼠自迷宫起点游至安全台所需时间和途中进入盲端的错误次数，连续测试4 d。
　　2.3.4  Y型迷宫穿梭实验测试前将小鼠放置起步区的反射臂中，不通电，让小鼠在三臂中进行探索，约2～3 min待其稳定后将小鼠抓至起步区，灯亮后2 s时，给予电刺激，直至小鼠最终逃到安全区后30 s，熄灯，作为一次测验。在24 h后检测小鼠10次训练中的正确次数。
　　2.4  统计学方法应用SPSS 13.0统计分析软件进行统计学处理，实验数据以±s表示，采用t检验，以P<0.05为有统计学差异。
3  结果
　　3.1  避暗实验测试结果各组小鼠避暗实验潜伏期和错误次数比较见表1。表1  各组小鼠避暗实验测实结果（略）与空白组比较，*P<0.05, △P<0.001；与模型组学习后比较，﹟P<0.05；n=8
　　3.2  跳台实验测试结果各组小鼠跳台实验潜伏期和错误次数比较见表2。表2  各组小鼠跳台实验测实结果（略）与空白组比较，*P<0.05，△P<0.01；与模型组学习后比较，﹟P<0.05，▲P<0.01；n=10
　　3.3  小鼠水迷宫实验测试结果各组小鼠水迷宫实验到达时间和错误次数比较见表3～4。表3  各组小鼠水迷宫实验测实结果比较（略）与空白组比较，*P<0.05，△P<0.01；与模型组比较，﹟P<0.05；n=10表4  各组小鼠水迷宫实验进入盲端错误次数测实结果比较（略）与空白组比较，*P<0.05，△P<0.001；与模型组比较，﹟P<0.05，▲P<0.01；n=10
　　3.4  小鼠Y型迷宫实验测试结果各组小鼠Y型迷宫实验在训练中达到9/10正确的实验次数与24 h后10次中正确次数见表5。表5  各组小鼠Y型迷宫穿梭实验测实结果（略）与空白组比较，*P<0.05；与模型组比较，﹟P<0.05；n=10
　　4  讨论
　　东当归是伞形科植物，化学成分主要含挥发油、有机酸、氨基酸、维生素等多种物质，阿魏酸钠也是当归中有效单体成分，具有抗氧化、抗自由基、抗炎等药理作用，有研究表明阿魏酸钠能对抗Aβ引起的小鼠学习记忆损伤，改善小鼠的学习记忆功能［4］。
　　本研究通过进行避暗实验、跳台实验、水迷宫实验、Y型电迷宫穿梭实验，均得出较相一致的结论，即在末次造模后，模型组与空白组比较，模型组成绩明显差于空白组，表明造模建立成功；东当归低浓度组与模型组比较无显著性差异；东当归中、高浓度组与模型组比较，成绩明显优于模型组。其中，中浓度组效果更加明显；东当归中、高浓度组都与石杉碱甲组比较无显著性差异。以上实验结果表明东当归乙醇提取物中、高浓度组对记忆障碍小鼠有良好的改善作用，其作用强度类似于石杉碱甲，为开发临床治疗老年痴呆症药物提供理论依据，具有一定的研究价值。
【参考文献】
  　　［1］肖增平，吉爱国．老年痴呆的发病机制及治疗的研究进展［J］．中国老年学书，2008,28（1）:95．

　　［2］杨金志．老年痴呆症:被充分重视的“老人杀手”［J］．今日科苑，2007，1:18．

　　［3］顾 维，丹 妮，永 清．当归芍药散治疗老年期痴呆的物质基础与作用机理研究［J］．中国实验方剂学书，2004，10(2):1．

　　［4］刘凤霞，王晓雯，罗 兰．肉苁蓉总苷对β-淀粉样肽所致阿尔采末病小鼠模型学习记忆的影响及其机制［J］．中国药理学通报，2006，22(5):595．

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